تركيز هلام الاغاروز تعتمد نسبة الاغاروز المستخدمة على حجم الأجزاء المراد فصلها. يشار إلى تركيز Agarose كنسبة مئوية من agarose إلى حجم المخزن المؤقت (w / v) ، وعادة ما تكون المواد الهلامية agarose في النطاق من 0.2 ٪ إلى 3 ٪ (Smith ، 1993). كلما انخفض تركيز الاغاروز ، زادت سرعة هجرة شظايا الحمض النووي.
بشكل عام ، إذا كان الهدف هو فصل قطع كبيرة من الحمض النووي ، فيجب استخدام تركيز منخفض من الاغاروز من بولي أكريلاميد (PAM) ، وإذا كان الهدف هو فصل قطع صغيرة من الحمض النووي ، يوصى بتركيز عالٍ من الاغاروز (الجدول 3). تركيز Agarose (٪) نطاق حجم الحمض النووي (bp) الجدول 3. تركيز هلام Agarose لحل جزيئات DNA الخطية. 3.2 تركيز هلام بولي أكريلاميد يعد اختيار تركيز مادة الأكريلاميد أمرًا بالغ الأهمية للفصل الأمثل لتركيز جزيئات هلام بولي أكريلاميد (PAM) (Hames ، 1998).
عن طريق اختيار التركيز المناسب لمادة الأكريلاميد وعامل الربط المتقاطع ميثيلينبيساكريلاميد ، يمكن التحكم في حجم مسام الهلام. مع زيادة النسبة المئوية للتركيز الكلي (T) للمونومر (أكريلاميد بالإضافة إلى الارتباط المتقاطع) في الهلام
مبادئ وأساسيات الرحلان الكهربائي لتركيز هلام البولي أكريلاميد (PAM)
يتناقص حجم مسام الجل في علاقة خطية تقريبًا. تستخدم المواد الهلامية ذات النسبة الأعلى (أعلى T) ، ذات المسام الأصغر ، لفصل الجزيئات الأصغر. العلاقة بالنسبة المئوية لإجمالي المونومر الذي يمثله الارتباط المتبادل (C) أكثر تعقيدًا. استقر الباحثون على قيم C بنسبة 5 ٪ (19: 1 أكريلاميد / بيساكريلاميد) لمعظم أشكال تغيير طبيعة الرحلان الكهربائي للحمض النووي والحمض النووي الريبي و 3.3 ٪ (29: 1) لمعظم البروتينات والحمض النووي الأصلي والمواد الهلامية للحمض النووي الريبي. من أجل التحسين ، يمكن استخدام المواد الهلامية بولي أكريلاميد من 5 إلى 10٪ مع الربط المتقاطع المتغير من 1 إلى 5٪. التشابك المنخفض (أقل من 3٪ C) مواد هلامية طويلة من الألياف مع زيادة حجم المسام (Glavač & Dean ، 1996). ينتج عن
بالإضافة إلى ذلك ، يجب ملاحظة تركيز هلام بولي أكريلاميد (PAM)
في التركيزات المنخفضة من الأكريلاميد / بيساكريلاميد ، يصعب التعامل مع المواد الهلامية لأنها لزجة ورقيقة. الجدول 4 نسب الأكريلاميد / بيساكريلاميد الموصى بها ونسب يوضح الهلام لنطاقات الأحجام الجزيئية المختلفة. نسبة هلام الأكريلاميد / القاعدة٪ الأصلية DNA / RNA (bp) DNA / RNA (bp) 19:: <40 <40 الجدول 4. تركيز هلام بولي أكريلاميد لحل جزيئات DNA / RNA. ملاحظة: التطبيقات الموصى بها لكل صيغة موضحة بالخط العريض.